La disfunción mitocondrial y la activación mitofagia en células mononucleares de sangre de los pacientes con fibromialgia: Implicación en la patogénesis de la enfermedad.
Introducción.
La fibromialgia es un síndrome de dolor crónico de etiología desconocida. Estudios recientes han mostrado Algunas pruebas que Demuestran que el estrés oxidativo Puede Tener un Papel en la fisiopatología de la fibromialgia. Sin embargo, todavía no está claro si el estrés oxidativo es la causa o el efecto de las anomalías documentadas en la fibromialgia.
Por otra parte, tambien es controvertido el papel de la mitocondria en el Desequilibrio redox enunciado en la fibromialgia. Se Realizó este estudio para investigar el papel de
La disfunción mitocondrial, el estrés oxidativo y la mitofagia en la fibromialgia.
Ario D. Cordero 1 2 *, Manuel De Miguel2 *, Ana. M. Moreno-Fernández2, Inés M.
Carmona-López2, Juan Garrido-Maraver1, David Cotán1, Lourdes Gómez Izquierdo3,
Pablo Bonal4, Francisco Campa4, 5, Pedro Bullon6, Plácido Navas1, y José A.
Sánchez-Alcázar1.
1Centro Andaluz de Biología del Desarrollo (CABD), Universidad Pablo de Olavide —
CSIC y el Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras
(CIBERER), ISCIII, Sevilla 41013. Dpto.
2. Citología e Histología Normal y Patológica, Facultad de Medicina. Universidad de Sevilla, Sevilla 41009.
3Departamento de Anatomía Patológica. Hospital Virgen del Rocío, Sevilla 41013.
4Dpto. de Medicina, Facultad de Medicina. Universidad de Sevilla, Sevilla 41009.
5Distrito Sanitario Sevilla Sur.
6Departamento de Periodontología, Facultad de Odontología, Universidad de
Sevilla 41009.
* Co-Autor Primario:
CORRESPONDIENTE Autor:
José A. Sánchez Alcázar. Centro Andaluz de Biología del Desarrollo (CABD).
Universidad Pablo de Olavide-Consejo Superior de Investigaciones Científicas.
Carretera de Utrera, km. 1, Sevilla 41013, spaña. Teléfono: 34 954349381. FAX: 34
954349376. Correo electrónico: jasanalc@upo.es. http://www.upo.es/CABD/
e-mails
MD Cordero (mdcormor@upo.es), M. De Miguel (mmiguel@us.es), AM Moreno —
Fernández (anamf@us.es), IM Carmona López (inescl65@hotmail.com) Y J.
Garrido-Maraver (biotec.7 @ hotmail.com), D. Cotán (lobolivares@hotmail.com), L.
Gómez Izquierdo (lourdesf.gomez.sspa @ juntadeandalucia.es), P. Bonal
(pbonal@us.es), F. Campa (fcampa@us.es), P. Bullón (pbullon@us.es), P. Navas,
(pnavas@upo.es).
Métodos.
Hemos estudiado 20 pacientes (2 varones y 18 hembras) reclutados de la
de La Base de datos de la Asociación de Fibromialgia de Sevilla y 10 controles sanos. Nosotros
evaluamos La función mitocondrial en células mononucleares sanguíneas de los pacientes con fibromialgia midiendo Los niveles de COENZIMA Q10 por HPLC (Cromatografía Líquida de alta eficacia), y el potencial de membrana mitocondrial por Citometría de flujo. El estrés oxidativo se determinó Mediante la medición de la Producción de Superóxido por MitoSOXTM mitocondrial y la peroxidación de lípidos en células mononucleares sanguíneas (BMC) en el plasma de pacientes con fibromialgia. La activación de la autofagia Fue evaluada cuantificando la intensidad de la fluorescencia de la tinción con LysoTrackerTM rojo en las células mononucleares sanguíneas. De La mitofagia Fue confirmada por la medición de la actividad de citrato sintasa y el examen al microscopio electrónico de las células mononucleares sanguíneas.
Resultados.
Se han encontrado Disminución de los Niveles de la COENZIMA Q10, Disminución en el potencial de la membrana mitocondrial, el alcalde de Nivel de Superóxido mitocondrial en células mononucleares de sangre, y Aumento en los Niveles de peroxidación lipídica, en tanto las células sanguíneas mononucleares y en el de plasma de pacientes con fibromialgia.
La disfunción mitocondrial tambien se Asocio A UN Aumento de expresión de los genes autofágicos y la Eliminación de las mitocondrias disfuncionales por mitofagia.
Conclusión.
Estos hallazgos Pueden Apoyar el papel del estrés oxidativo y la mitofagia en la fisiopatología de la fibromialgia.
Palabras clave: Coenzima Q10, la fibromialgia, la disfunción mitocondrial, estrés oxidativo,
mitofagia
Introducción
La fibromialgia (FM) es un síndrome de dolor crónico común acompañado de otros
síntomas como fatiga, dolor de cabeza, trastornos del sueño y depresión. Se diagnostica
de Acuerdo A LOS Criterios de clasificación Establecidos por el Colegio Americano de
Reumatología (ACR). [1]
A Pesar de ser un trastorno común que un Afecta por lo menos 5
millones de personas en los Estados Unidos [2], su Mecanismo patógeno Sigue Siendo esquiva.
Recientemente, los marcadores de estrés oxidativo han sido propuestos como un Hecho relevante en la patogénesis de este trastorno. [3, 4]
Anteriormente, hemos detectado Disminución de los Niveles de COENZIMA Q10 (CoQ10) y el Aumento de la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) en células mononucleares sanguíneas de los pacientes con FM proporcionando evidencia directa de aumento del estrés oxidativo A nivel celular. [5].
La CoQ10 Desempeña un papel crucial en el metabolismo celular que Actúa como un portador de electrones entre el Complejos I y II y el complejo III de la cadena respiratoria mitocondrial. La CoQ10 También ha sido informado que desempeñan un papel Importante en la regulación de las proteínas de desacoplamiento, poro de transición de permeabilidad mitocondrial, β-oxidación de ácidos grasos, y de la ruta de biosíntesis de nucleótidos. [6].
Además, Los niveles de CoQ10 se han sugerido para ser útil como un
marcador de la disfunción mitocondrial. [7] La deficiencia de CoQ10 inducir Disminución de las actividades de los complejos II + una expresión reducida de las proteínas mitocondriales IMPLICADAS en la III, complejo Complejo III y IV, Fosforilación oxidativa, Disminución del potencial de la membrana, aumento de la producción mitocondrial de especies reactivas de oxígeno (ROS), la activación de la transición de permeabilidad mitocondrial (MPT), la mitofagia de las mitocondrias disfuncionales, y las Tasas de crecimiento reducido. [8, 9]
El propósito del presente trabajo Fue Evaluar la disfunción mitocondrial en la sangre de
Las células mononucleares de pacientes con FM y para dilucidar si la alteración mitocondrial
estuvo implicada en la fisiopatología del presente estrés oxidativo en FM.
Material y Métodos
Los pacientes y los controles.
El estudio se Realizó con el consentimiento informado de todos los participantes y la Aprobación
del comité de ética local. Hemos estudiado 20 pacientes (2 varones / 18 mujeres)
recogidos de la base de datos de la Asociación de Fibromialgia de Sevilla (AFIBROSE) y de
10 controles sanos (2 varones / 8 mujeres). El diagnóstico de la FM Fue Establecido por la ONU
Reumatólogo Experimentado un Acuerdo de Criterios de la ACR. [1] Todos los pacientes y los controles no han tomado Ningún Medicamento o suplemento vitamínico y nutricional Durante un periodo de 15 días antes de la recogida de las muestras de sangre.
Células mononucleares de sangre cultivadas.
Las células mononucleares de sangre periférica (BCM) fueron purificados de sangre heparinizada Mediante centrifugación usando isopícnicas Histopaque-1119 y Histopaque-1077 (Sigma Chemical Co. St. Loui s. Mo EE.UU.). Las Fueron BMC cultivadas a 37 º C en una Atmósfera de CO2 del 5% en RPMI-1640, medio suplementado con L-glutamina, un antibiótico y solución antimicótica (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, EE.UU.) , y el 10% de suero bovino fetal.
De la Medición de los Niveles de CoQ10
Contenido CoQ10 en BMC se analizaron por HPLC (Cromatografía Líquida de alta eficacia) (Beckmann 166-126 HPLC) con detección ultravioleta (275 nm) de Acuerdo con el método de Montero et al. [10]
Potencial de membrana mitocondrial (DΨm)
De BMC Fueron cultivadas en seis pocillos (de 35 mm de diámetro) hasta su confluencia.
Mitotracker Red CMXRos (Invitrogen / Molecular Probes, Eugene, OR) 100 nm Fue
añadido e incubado durante 30 min. Luego, las células Fueron lavadas y analizadas por el flujo Citométrico.
Producción mitocondrial de ROS (indicador de rojo superoxidación mitocondrial)
La generación mitocondrial de ROS en BMC Fue evaluada por MitoSOX ™ (Pruebas Invitro / Moleculares), un indicador rojo de superoxidación mitocondrial. Las incubados BMC Fue con 1μM Durante MitoSox 30 minutos a 37 ° C, se lavaron dos veces con PBS (Tampón Fosfato alcalino). Las céluas Fueron analizadas por citomtría de flujo. Para ensayar la producción de ROS con las células antioxidantes, las células mononucleares Incubadas Fueron 24 horas con 10μM CoQ10, 30μM alfa-tocoferol (α-toc) y de 10 mm N-acetilcisteína (N-ácido acético) (Sigma Chemical Co., ST . Louis, MO, EE.UU.
Peroxidación Lipídica
LOS NIVELES en plasma de TBARS (Sustancias reactivas del ácido tiobarbitúrico) fueron determinados por un método basado en la reacción con un ácido tiobarbitúrico 90-100 º C. La Peroxidación lipídica Fue analizada en las células Mediante el análisis de la Acumulación de lipoperóxidos Utilizando un Kit Comercial de Cayman Chemical (Ann Arbor, Michigan). Las TBARS se expresan en términos de los Niveles de malondialdehído (MDA). En Estos ensayos, se Utiliza un estándar de MDA para Construir una curva patrón contra el Cual las muestras problema trazar SE PUEDEN.
Carga de rojo lysorastreador.
Las BMC Fueron cultivadas en medio RPMI-1640. Rojo, LysoTrackerTM (Pruebas moleculares / in vitro.) (100 nM), una Célula-fluoruforo permeante que tipicamente SE CONCENTRAN EN vacuolas ácidas, se añadió a las BMC aisladas de control de pacientes con FM. Después de 30 minutos, las células Fueron lavadas y la fluorescencia roja de Lysotracker Fue cuantificada por Citometría de flujo
Tiempo Real de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)
La expresión de ambos MAP-LC3 y BECLIN de1 gen en BMC Fue analizada por SYBR Green PCR cuantitativa Utilizando extractos de cebadores y ARNm (1). El tiempo real BECLIN del cebador 1 5′-GGA TGG TGG ATG GAA GCA AGA AG-3 ‘(cebador hacia delante) y 5′-TGA GGA CCA AGC AAG ACC-3′ (cebador hacia atrás) ampliaron A UNA secuencia de 152 nucleótidos. Los cebadores humanos MAP-LC3 5’-TTC GCC TTC CTG CTG GTC AAC-3 ‘(
(Cebador hacia delante) y 5′-AGC CGT AAC CGT CTT TCT CC-3 ‘(cebador hacia delante) ampliaron hasta una secuencia de 91 nucleótidos. La Actina Se utilizó como un controlador de generación del orden.
Medición de la actividad de la Citrato sintasa
La actividad específica de la citrato sintasa, en extracto de células completas, preparado a partir de extractos de células de BMC Fue medido un 412 nm A falta de 360 nm (13,6 mm-1 cm-1) Utilizando 5,5-bis ditio-(2-ácido nitrobenzoico) para Detectar los grupos sulfhidrilos libres en la COENZIMA A, tal como se describe previamente [11].
Microscopía electrónica.
Las BMC se fijaron durante 15 minutos con glutaraldehído al 2% en medio de cultivo, A continuación, durante 30 minutos, en glutaraldehído al 2%, 0,1 M NaCacodylate / HCl, pH 7,4. Las muestras Fueron procesadas como se describió anteriormente. [9] Las observaciones Se realizaron en un microscopio electrónico Philips CM-10 de transmisión.
El análisis estadístico
Todos los resultados se expresan como media ± desviación estándar uno menos que se indique lo contrario. La desapareada Prueba t de Student Fue utilizada para Evaluar las Diferencias significativas entre los grupos. El análisis estadístico incluyo las correlación de Pearson entre Los niveles de CoQ10 y Los niveles de expresión de los genes autofágicos. Valores de p <0,05 SIGNIFICATIVOS Fueron CONSIDERADOS.
Resultados
Disfunción mitocondrial en pacientes con Fibromialgia.
La Edad Media de los pacientes Fue de 50,8 ± 8,6 para el grupo de FM y 49,1 ± 9,8 años para el
grupo de control. Los medios de comunicación La duración de los síntomas en el grupo de FM Fue de 13,65 ± 9,19 años. De Los SIGNIFICATIVOS puntos dolorosos en el grupo de FM Fue de 14,9 ± 3,1 puntos. Las características más destacadas de Estos pacientes de FM son el dolor y la rigidez. Eran personas de vida sedentaria. Las pruebas de rutina de laboratorio dan resultados normales de glucosa urea, ácido úrico, proteínas totales, creatinina, aspartato aminotransferasa, Alanina aminotransferasa, el colesterol y los triglicéridos (Los datos no muestran Se).
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(1 *) Cebadores oligonucleótido QUE SON CADA UNO complementarios en la cadena de ADN. Son secuencias cortas entre 6 y 40 nucleótidos Reconocidos hijo que por la polimerasa iniciando la reacción.
Los niveles de CoQ10, Determinado en las BMC aisladas de 20 pacientes de FM, se encuentra un 40% menor que en las células de control (Figura 1A). Para Examinar más a fondo la disfunción mitocondrial en BMC de los pacientes con FM, se determinó el potencial de la membrana mitocondrial (DΨm) por Citometría de flujo. Potencial de membrana mitocondrial (DΨm) Estaba reducido significativamente en un 36% en el BMC de los pacientes con FM (Figura 1B).
El estrés oxidativo en FM
El estrés oxidativo se ha propuesto como un Hecho relevante en la patogénesis de FM. [3,
12] En un trabajo anterior, hemos demostrado la presencia de Alto Nivel de la Producción de Ros en las BMC de los pacientes con FM. [5] A fin de Evaluar el origen mitocondrial de la Producción de Ros, las BMC de los pacientes de FM y control Fueron EXPUESTOS un MitoSOX ™, un indicador rojo de superoxidación mitocondrial. La cuantificación de la Producción de Ros Análisis por Citometría de flujo de las Naciones Unidas demostró Aumento significativo en la producción de ROS en las mitocondrias de BMC de los pacientes de FM con respecto al control (Figura 2A). Además,
se determinó la peroxidación lipídica como un marcador de estrés oxidativo inducido por la membrana mitocondrial dañada por ROS mitocondrial en las BMC, y el plasma de pacientes con FM. Por regla general, los pacientes de FM mostraron un nivel más alto de la peroxidación lipídica, tanto en las células como en el plasma, con Respecto a los sujetos de control (Figura 2B y 2C).
Para Examinar más a fondo el papel de la generación de ROS en pacientes de FM, las BMC de un paciente representativa Fueron Incubadas CON TRES antioxidantes, CoQ10, α-toc, y la N-ACET, y se examino la Producción mitocondrial de ROS ( Figura 3). Sólo Los antioxidantes lipofílicos, CoQ10 y α-toc atenúan significativamente la producción de ROS.
Autofagia en BMC pacientes de FM
Recientemente, se ha DEMOSTRADO que la deficiencia de CoQ10 exhibida en los fibroblastos disminuyen Los niveles de marcadores lisosomales (β-galactosidasa, catepsina, LC3 y LYSO Tracker), y Aumentan la expresión de los genes tanto autofágicos A nivel de la transcripción y traducción, Indicando la presencia de la autofagia. [9] Para Comprobar Que La deficiencia de CoQ10 También inducir la activación de la autofagia en BMC de los pacientes con FM, lo primero que cuantificamos hijo NIVELES Los de ácido en las
vacuolas en BMC y fluorescencia Lysotracker Mediante el Análisis de Citometría de flujo.
Las vacuolas ácidas aumentaron significativamente en las BMC de paciente con Respecto a los controles (Figura 4A). El fin de dilucidar si la autofagia en la Con CoQ10 deficiente en BMC Puede ser mitigados Mediante la restauración de la Funcionalidad de la mitocondria por la suplementación con CoQ10, nosotros cultivamos tanto el paciente y el control de BMC en presencia de CoQ10 (100 μM) durante 24 horas y los analizamos por fluorescencia de Lysotracker. Como se muestra en la figura 4B, La suplementación drástica CoQ10
redujo drásticamente la intensidad de la fluorescencia Lysotracker,
lo que indica una Reducción de la actividad lisosomales Después del tratamiento CoQ10.
Además, hemos analizable con la expresión de los genes Implicados en los procesos de autofagia, como BECLIN 1 y MAP-LC3. Figura 5A y 5B de Los muestran que los genes se autofágicos
sobreexpresados en las BMC, de 5 de los 8 pacientes estudiados, en Comparación con el control.
Los pacientes con FM y Aumento en la expresión de los genes autofágica Fueron Aquellos con una más pronunciada deficiencia de CoQ10 (P3, P5, P6, P7, P8). Hubo una correlación negativa entre la expresión de los genes y autofágicos Los niveles de CoQ10 (r = -0,80, p <0,01 para BECLIN 1, yr = -0,76, p <0,001 para el MAP-LC3) ( Figura 5C). Para Determinar si la autofagia es específica para las mitocondrias, se examino en primer lugar
masa mitocondrial en células BMC Derivadas de pacientes con FM. Se prepararon extractos de BMC y de control de los pacientes de FM y fureron analizados para la actividad de la Citrato sintasa. La Citrato sintasa es una proteína de la matriz mitocondrial Cuya actividad se ha DEMOSTRADO que se correlaciona bien con la masa mitocondrial. [13] La figura 6A muestra una Disminución estadísticamente significativa en la actividad de la citrato sintasa en las BMC de los pacientes con FM en Comparación con los controles. De La reproducibles Reducción de la actividad de la Citrato sintasa indica una Disminución de la masa mitocondrial y la
Degradación Sugiere selectiva de las mitocondrias. Para confirmar la presencia de la
La Degradación mitocondrial o mitofagia en las BMC, luego realizamos microscopía electrónica en el grupo control y el paciente BMC (Figura 6B y 6C). La figura muestra Claramente 6C
La presencia de autofagosomas en BMC de un paciente Representante de FM (P6)
Indicando la autofagia amplia de las mitocondrias. En autofagosomas tempranos Claramente Puede observarse que las mitocondrias se estan degradando.
Discusión
Las mitocondrias generan la energía principalmente en forma de gradiente de protones electroquímico, que alimenta la producción de ATP, el transporte de iones, y el metabolismo. Las mitocondrias son También la principal fuente de ROS (Indicador de superoxidación mitocondrial rojo). Ambos complejos I y III, junto con la CoQ10 (Coenzima Q 10) hacen perder electrones al oxígeno. [14-17]. La deficiencia de CoQ10 se ha Asociado a una variedad de trastornos humanos, Algunas de ellos causados por un defecto directo de la biosíntesis de los genes de la CoQ10 o como una consecuencia secundaria de otras enfermedades. [18, 19] Los resultados recientes muestran que la deficiencia de CoQ10 altera La función mitocondrial y la organización de los complejos de la respiración mitocondrial, lo que lleva una una producción aumentada de ROS, la activación de la MPT (Transcision de Permeabilidad Mitocondrial) y el Aumento de la autofagia de las mitocondrias disfuncionales por mitofagia. [8, 9] En el presente estudio, se encontró que la deficiencia de CoQ10 en las BMC (células Mononucleares Sangíneas) los pacientes con FM mostraron Altos niveles de producción de ROS en las mitocondrias y el Aumento de la peroxidación lipídica, tanto en las células como en el plasma.
En este aspecto, los Altos niveles de la peroxidación lipídica y carbonilos de proteínas, [20, 21] y las alteraciones en la homeostasis de las placas del ATP (energía celular producida en las
Mitocondrias) se han Observado en los pacientes de FM (Fibromialgia) [22] El Hecho α CoQ10 De Que La Y-toc, dos antioxidantes lipofílicos, significativamente redujesen de la Producción mitocondrial de Ros, que tambien los Sugiere ROS Fueron producidos en Medio Ambiente lipofílico de las membranas mitocondriales y que la deficiencia de la CoQ10 Puede estar implicada en el estrés oxidativo en FM.
Si el daño oxidativo juega un papel en los de FM de las Naciones Unidas Través de la mitofagia MPT activación de la Y,
luego las estrategias terapéuticas que reduzcan ROS Puede Mejorar el Proceso patológico.
Pero, ¿Cuál es la Relación entre el estrés oxidativo y los síntomas de FM? Recientes
Los estudios han DEMOSTRADO que el estrés oxidativo Puede causar sensibilización periférica y central y alterar la nocicepción, [23], resultando una hiperalgesia mediada por ambos Mecanismos antioxidantes locales y de la columna vertebral.
Además, el estrés oxidativo es el alcalde en pacientes con Síndrome de Fatiga Crónica
[24, 25] La superóxidación Juega un Papel Importante en el desarrollo del Dolor a Través de la sensibilización periférica directa, la liberación de varias Citocinas (por ejemplo, el TNF-α, IL-1β e IL-6), La formación de peroxinitrito (ONOO-), y PARP
de activación. [23] Además, los estudios sobre la depresión, un Síntoma típico en pacientes con FM, han aclarado la posible Relación entre la depresión y la peroxidación de los lípidos [26].
La peroxidación Puede Desempeñar un Papel Importante en la depresión y la peroxidación Reduciendo Efectos de diferentes inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina en la depresión mayor ha sido DEMOSTRADO por Bilici et al. [27].
Además, y Apoyando el papel de la disfunción mitocondrial, las BMC de los pacientes de FM
mostraron una Disminución de 36% del potencial de membrana mitocondrial (DΨm), que Posiblemente Refleja una Reducción de flujo de electrones y bombeo de protones ocasionada por la deficiencia de COENZIMA P.
Curiosamente, se ha demostrado una correlación positiva entre el contenido de
CoQ10 en las BMC y el músculo esquelético, [28, 29] Por lo tanto la deficiencia de CoQ10 y
La disfunción mitocondrial Tambien puede estar presente en otras células y tejidos en pacientes con FM. Además, los cambios en la morfología y en el número de mitocondrias se han
mostrado en el músculo esquelético de los pacientes con FM, [30-32] lo que Sugiere el papel de
La disfunción mitocondrial en este trastorno. La deficiencia de CoQ10, la disfunción mitocondrial y la de las células Bioenergéticas también podría Explicar La Baja Capacidad aeróbica y muscular que se observa en Algunos grupos de pacientes con FM. [33, 34]
Se ha propuesto que los Daños ROS Pueden inducir MPT Mediante la apertura de la permeabilidad en la transición de los poros de la membrana interna mitocondrial. [35-37] Esto a su vez, conducen un colapso de las Naciones Unidas Simultáneo del potencial de membrana mitocondrial y la Eliminación de la mitofagia por disfunción mitocondrial. Nuestros resultados Apoyan esta hipótesis, mostrando la presencia de mitofagia en BMC de pacientes con FM. La autofagia es un vía lisosomales regulada que participa en la Degradación y reciclaje de materiales citoplasmáticos. [38-42] Durante la autofagia, los materiales secuestrados hijo citoplasmática Dentro de la doble membrana en vesículas, ‘autofagosomas’, que se fusionan con los Lisosomas autolisosomas para Formar, donde la Degradación de las estructuras celulares se Producen. Muchas celulas estresadas Pueden Causar inducción a la autofagia, como el estrés del retículo endoplásmico, la disfunción mitocondrial o el estrés oxidativo. [42-44]. La Mitofagia Fue acuñado para describir la Eliminación selectiva de la mitocondria por la autofagia Durante el desarrollo y bajo condiciones patológicas. [36, 45] En nuestro trabajo, el análisis bioquímico de la citrato sintasa indica una Reducción de la masa mitocondrial sugiriendo una Degradación selectiva mitocondrial por mitofagia en las BMC de pacientes con FM. Estos resultados Fueron confirmados por microscopía electrónica que muestra Claramente autofagosomas donde las mitocondrias Están Siendo Degradadas. La autofagia Puede ser beneficiosa para las células por la Eliminación de las mitocondrias disfuncionales, pero la autofagia masiva Puede Promover el daño celular [41] Puede y CONTRIBUIR a la fisiopatología de la FM.
Conclusión
En nuestro estudio Apoya la hipótesis de que la deficiencia de CoQ10, el estrés oxidativo y la amplia mitofagia Puede CONTRIBUIR al Desequilibrio bioenergetico comprometiendo la
Celular funcionalidad. El Funcionamiento anormal de las BMC Pueden Promover el estrés oxidativo y una CONTRIBUIR Puede alterar la nocicepción en FM.
Lista de abreviaturas utilizadas
α-toc, alfa-tocoferol, BMC, las células mononucleares de la sangre; CoQ10, Q10 COENZIMA, FM,
Fibromialgia; MPT, la transición de permeabilidad mitocondrial, ROS, reactivas de oxígeno
especies; TBARS Sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico.
Intereses en conflicto
«El autor (s) que declaran no Tienen Intereses de competición (contrários)».
Las Contribuciones de los revisores o autores
MDC, MDM, AMNF, IMCL, y JGM ha realizado los estudios bioquímicos. Y DC
LGI llevado A Cabo Los estudios de microscopía electrónica. PB y el FC Participó en el diseño d del Realizó el estudio estadístico y análisis. PB, PN, y el concebió JASA
Estudio, y Participó en su diseño y la Coordinación y la ayudo un Redactar el manuscrito.
Todos los autores han leído y aprobado el manuscrito final.
Información de los autores (si los hubiera)
Agradecimientos:
Este trabajo Fue financiado por el FIS y FIS PI080500 Concesión de subvención EC08/00076, Ministerio de Sanidad, España, los autores DeSean Dedicar este manuscrito A LOS pacientes de FM y de AFIBROSE (Asociación de Fibromialgia de Sevilla) por su ayuda incondicional.
Leyendas
Figura 1. Los niveles de COENZIMA Q10 y el potencial de membrana mitocondrial (DΨm) en las BMC de los pacientes de FM y controles sanos. NIVELES Grupo A. Los de CoQ 10 Fueron medidos por HPLC como se describe en Material y Métodos. Los datos Representan la media ± SD de tres experimentos independientes. Grupo B. Los Potenciales de membrana mitocondrial (DΨm) fueron analizados en BMC de los sujetos y el control de los pacientes de FM por Citometría de flujo tal como se describen en material y métodos. Los datos Representan la media ± SD de tres experimentos independientes.
* P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM.
Figura 2. LA PRODUCCIÓN DE ROS y la peroxidación de lípidos en pacientes con FM.
Grupo A. La producción de Ros se analizo con BMC de los sujetos de control y los pacientes de FM por el flujo de Citometría de como se describe en material y métodos. La peroxidación de los lípidos (Los niveles de MDA) en BMC (Grupo B) y de plasma (Grupo C) de los sujetos de control y los pacientes de FM se determina como se describe en Material y Métodos. Los datos Representan la media ± SD de tres experimentos independientes. * P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM.
Figura 3. Efecto de los antioxidantes en la generación de ROS.
Las BMC representivo de un paciente de FM Fueron Tratados con 10μM CoQ10, 30μM alfa-tocoferol (α-toc) y 10μM N-acetylcisteina (N-ACET) durante 24 h. Los datos Representan la ttmedia ± SD una de las tres experimento.
P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM, ** p <0.005 entre la ausencia
o La presencia de CoQ10 o tratamiento con α-toc.
Figura 4. Marcadores de autofágicos en BMC de pacientes con FM.
El Grupo A. La cuantificación de vacuolas ácidas en el control y el paciente BMC por fluorescencia y LysoTracker Análisis de flujo citometrico. Grupo B. Reducción de la fluorescencia en las LysoTracker BMC de pacientes de FM bajo un suplemento de CoQ10 (100 μM) durante 24 horas. Los datos Representan la media ± desviación estándar de tres experimentos independientes. * P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM;
Figura 5.Expresión Autofágica de los genes de los
Los niveles de expresión de BECLIN 1 (Grupo A), y MAP-LC3 (Grupo B) transcritas en las
BMC de los controles y los pacientes de FM Fueron evaluados por PCR en tiempo real como se describen en material y métodos. Los datos Representan la media ± SD de tres experimentos independientes.
* P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM. Grupo C. La correlación de los Niveles de CoQ10 y de BECLIN 1 y MAP-LC3 Los niveles de expresión en BMC de pacientes con FM.
Figura 6. Mitofagia en pacientes con FM. Grupo A. Disminución de la masa mitocondrial en las BMC de pacientes con FM. La actividad específica de la Citrato sintasa en las BMC y de control de los pacientes de FM se Realizó Como se describe en Material y Métodos. Los datos Representan la media ± desviación estándar de tres experimentos independiente.
* P <0.001 y entre el control de los pacientes de FM.
Grupo B. Ultraestructura de las BMC de pacientes con FM. El control de las mitocondrias BMC está mostrando con una ultraestructura típica. Los Autofagosomas con mitocondrias (flechas) Estuvieron presentes en BMC de un paciente de FM representante (P6), Bar = 1 micra.
Referencias
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